Ludzki wirus niedoboru odporności typu 1 w nasieniu mężczyzn otrzymujących wysoce aktywną terapię przeciwretrowirusową ad 5

Gdy limfocyty T CD8 nie zostały zubożone w komórki krwi obwodowej stosowane w hodowlach, nie można było wyizolować wirusów z limfocytów krwi obwodowej lub komórek nasiennych od żadnego z mężczyzn (dane nie przedstawione). Charakterystyka genotypowa i fenotypowa kompetentnego pod względem replikacji wirusa HIV-1
Aby zbadać, czy wirusy zdolne do replikacji odzyskane z komórek nasiennych mogą być przenoszone drogą płciową, zbadano sekwencje w regionie pętli V3 i fenotyp wirusów (tabela 2). Zgodnie z ładunkiem netto aminokwasów w pętli V3 (ładunek o wartości +4 lub mniejszej wskazuje na wirus zwrotny makrofagów, a ładunek +5 lub więcej zazwyczaj oznacza wirus tropowy linii komórkowej T) i wzory wzrostu w hodowli komórkowej, 27,28 wirus wyizolowany z komórek nasiennych Pacjenta 6 był typowym szczepem makrofagowo-zwrotnym, podczas gdy wirus wyizolowany z komórek nasiennych Pacjenta 4 miał podwójny tropizm. Większość szczepów HIV-1 przenoszonych drogą płciową jest makrofagami zwrotnikowymi lub ma dwa tropizmy11,29,30; dlatego wirusy zdolne do replikacji wyizolowane z komórek nasiennych tych ludzi są potencjalnie zdolne do zainicjowania pierwotnej infekcji u partnera seksualnego, nawet jeśli ci mężczyźni otrzymywali wysoce aktywną terapię przeciwretrowirusową i mieli niewykrywalny poziom wirusowego RNA w osoczu.
Różnice w sekwencjach regionu pętli V3 pomiędzy wirusami odzyskanymi z limfocytów krwi obwodowej a tymi odzyskanymi z komórek nasiennych z Pacjentów 4 i 6 sugerują, że przynajmniej część replikacji wirusa jest podzielona na segmenty w obrębie układu męskich narządów płciowych i krwi obwodowej, jak opisano wcześniej.11 Sekwencje również wskazują, że odzyskiwalne, kompetentne pod względem replikacji wirusy z komórek nasiennych i limfocytów krwi obwodowej pochodzą prawdopodobnie z prowirusowego DNA w tych komórkach (Tabela 2). Read more „Ludzki wirus niedoboru odporności typu 1 w nasieniu mężczyzn otrzymujących wysoce aktywną terapię przeciwretrowirusową ad 5”

Ludzki wirus niedoboru odporności typu 1 w nasieniu mężczyzn otrzymujących wysoce aktywną terapię przeciwretrowirusową czesc 4

Próbki krwi i nasienia od dwóch zdrowych mężczyzn służyły jako kontrole negatywne. Drugi zestaw próbek uzyskano od Pacjentów 3 i 4 dwa do trzech miesięcy po pierwszym zestawie. Charakterystykę siedmiu mężczyzn przedstawiono w tabeli 1. Poziomy RNA HIV-1 w osoczu i płynie nasiennym tych mężczyzn wynosiły poniżej 50 kopii na mililitr, a zatem były znacznie niższe niż poziomy u mężczyzn z nieleczonymi zakażeniami HIV-1. którzy byli oceniani w tym samym teście (od 1500 do 75 000 kopii na mililitr płynu nasiennego). Read more „Ludzki wirus niedoboru odporności typu 1 w nasieniu mężczyzn otrzymujących wysoce aktywną terapię przeciwretrowirusową czesc 4”

Ludzki wirus niedoboru odporności typu 1 w nasieniu mężczyzn otrzymujących wysoce aktywną terapię przeciwretrowirusową cd

Po 24 godzinach komórki przemyto trzy razy solanką buforowaną fosforanem i hodowle utrzymywano w obecności interleukiny-2 (10 U na mililitr) przez sześć tygodni. Dwa razy w tygodniu połowę pożywki zastępowano świeżą pożywką, a raz na tydzień komórki uzupełniano 2 milionami świeżych, leczonych limfocytów krwi obwodowej od normalnych osobników. Antygen p24 HIV-1 mierzono w supernatantach za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA) (Dupont, Wilmington, Del.). Wszystkie procedury przeprowadzono w warunkach bezpieczeństwa biologicznego poziomu P3, aby zminimalizować możliwość zanieczyszczenia krzyżowego. Analizy sekwencji DNA
Sekwencje pętli V3 regionu gp120 wirusowej otoczki (env), proteazy i genów RT HIV-1 zostały określone przez nested PCR test obu prowirusowych DNA (bezpośrednio z próbek krwi obwodowej i komórek nasiennych) i otoczonego wirionem RNA (z replikacji wirusa w kokulturze). Read more „Ludzki wirus niedoboru odporności typu 1 w nasieniu mężczyzn otrzymujących wysoce aktywną terapię przeciwretrowirusową cd”

Ludzki wirus niedoboru odporności typu 1 w nasieniu mężczyzn otrzymujących wysoce aktywną terapię przeciwretrowirusową ad

Komórki nasienne oddzielono od płynu nasiennego przez odwirowanie przy 500 x g przez 10 minut w 4 ° C. Związane z komórkami poziomy prowirusowego DNA HIV-1 i poziomy RNA związane z wirionem mierzono jak opisano poprzednio. 20-22 Aby oddzielić wiriony od plazmy i płynu nasiennego, próbki odwirowano przy 150 000 xg przez jedną godzinę. RNA wyizolowano z granulek kwasem ekstrakcyjnym z tiocyjanianem-fenolem i chloroformem.23 DNA ekstrahowano z komórek jednojądrzastych krwi obwodowej i komórek nasiennych za pomocą standardowej metody20. Sekwencje DNA i RNA gag HIV-1 wykryto za pomocą zestaw starterów-sond SK38, SK39 i SK19.20-22 Gen .-globiny oznaczono ilościowo w DNA z jednojądrzastych komórek krwi obwodowej i komórek nasiennych za pomocą testu PCR z PCO3 i PCO4 jako parą starterów, jak opisano wcześniej , 20-22 jako kontrola obciążenia, w celu potwierdzenia, że każda próbka zawierała podobne ilości DNA przed rozpoczęciem PCR. Read more „Ludzki wirus niedoboru odporności typu 1 w nasieniu mężczyzn otrzymujących wysoce aktywną terapię przeciwretrowirusową ad”

Ludzki wirus niedoboru odporności typu 1 w nasieniu mężczyzn otrzymujących wysoce aktywną terapię przeciwretrowirusową

Transmisja seksualna odgrywa główną rolę w rozprzestrzenianiu się ludzkiego wirusa niedoboru odporności typu (HIV-1). Nasienie zarażonych mężczyzn może zawierać wysoki poziom HIV-1, a wirusy zakaźne można odzyskać z komórek nasiennych lub płynu nasiennego od tych mężczyzn.1-4 Komórki nasienne to mieszanina plemników, prekursorów komórek płciowych, limfocytów T, makrofagów, a komórki nabłonka i prowirusowy DNA HIV-1 wykryto w kilku typach tych komórek.4-8 Poziom RNA HIV-1 w płynie nasiennym można również skorelować z poziomem w osoczu, a leczenie przeciwretrowirusowe zmniejsza poziomy tylko w osoczu, ale także w płynie nasiennym.9,10 Często występują znaczące różnice w miano wirusa i sekwencjach wirusowych między nasieniem a krwią obwodową, co sugeruje, że replikacja HIV-1 może być podzielona na komórki in vivo. Ostatnio terapia kombinacjami leków przeciwretrowirusowych, określana jako wysoce aktywna terapia antyretrowirusowa, spowodowała zahamowanie RNA HIV-1 w osoczu poniżej granic wykrywalności wielu układów testowych i zwiększyła przeżywalność wielu zakażonych HIV-1 pacjenci. 13,14 U tych pacjentów obciążenie wirusowe w tkankach limfoidalnych jest dramatycznie zmniejszone, 15,16, ale DNA prowirusowe można wciąż wykryć w spoczynkowych limfocytach T CD4 we krwi obwodowej, a wirus zdolny do replikacji można odzyskać z tych komórek. , co wskazuje, że komórki mogą być rezerwuarem do replikacji wirusa.17-19 HIV-1 może replikować się w wielu typach komórek i wielu miejscach w ciele, ale czy tkanki i komórki inne niż spoczynkowe limfocyty CD4 T w krwi obwodowej nie zawierają replikacji- Właściwy wirus u pacjentów otrzymujących długoterminowo wysoce aktywną terapię przeciwretrowirusową nie jest znany. Read more „Ludzki wirus niedoboru odporności typu 1 w nasieniu mężczyzn otrzymujących wysoce aktywną terapię przeciwretrowirusową”