ananas suszony właściwości

Mutant ze wszystkimi substytucjami aminokwasowymi (SIVsmE543CT # 154) wykazał porównywalny wzrost uwalniania wirusa z mutantami z pojedynczym podstawieniem (P = 0,0004 wobec WT E543-3 Env), co sugeruje, że liczba substytucji aminokwasów nie koreluje z stopień zwiększenia uwalniania wirusa, przynajmniej w tym teście in vitro (Figura 7). Było to zgodne ze wzorem wyników dla zwiększonej replikacji tych wariantów w MDM (Figura 4, A i B). Korelacja tych cytoplazmatycznych mutacji gp41 zarówno z nasilonymi antagonistami BST-2, jak i replikacją w MDM bardzo sugeruje związek przyczynowy. Jednakże, nie byliśmy w stanie potwierdzić związku przyczynowo-skutkowego przy użyciu makrofagów pierwotnych do pomiaru uwalniania wirusa nadawanego przez substytucje gp41 z powodu trudności technicznych w wykonywaniu takich testów w MDM. Ryc. 7SIVmowe białka Env z mutacjami w cytoplazmatycznym ogonie zwiększają uwalnianie cząstek HIV-1. (A) Analiza kinetyczna uwalniania cząstek wirusa przez pNL4-3 / Udel-1 z niedoborem Vpu w obecności wirusa HIV-2 Env lub SIVsm Env. Komórki 293T transfekowano pNL4-3 / Udel-1 i DNA rBST-2 razem z wektorami HIV-2 Env wektory pHA-ROD14-Env i pHA-ROD10-Env jako kontrole, jak również wektorami do ekspresji Envs znakowanych HA od SIVsmE543 WT lub mutanta SIVsmE543 # 1, # 2, # 3, # 4 i # 154. Próbki poddano analizie za pomocą impulsów, a białka wirusowe odzyskane przez immunoprecypitację rozdzielono za pomocą SDS-PAGE. Główne białka Gag HIV-1 p55gag i p24CA zostały zidentyfikowane po prawej stronie. (B) Ekspresję białka dla Env i rBST-2 zweryfikowano za pomocą analizy Western blot przy użyciu komórkowej a-tubuliny jako kontroli obciążenia. Przedstawiono reprezentatywne dane z 2 niezależnych eksperymentów. (C) Pasma odpowiadające prekursorowi i dojrzałe białka Gag w A zostały określone ilościowo, a wydajność uwalniania cząstek w każdym punkcie czasowym obliczono jak na Figurze 4 i wykreślono jako funkcję czasu. Pasma odpowiadające prekursorowi i dojrzałym białkom Gag w A oznaczono ilościowo, a wydajność uwalniania cząstek w każdym punkcie czasowym obliczono jak na Figurze 4 i wykreślono w funkcji czasu. Dane oznaczają środki. SEM obliczono z 2 niezależnych eksperymentów. ** P. 0,01; *** P. 0,001; i p . 0,0001, 2-drożna ANOVA (kinetyka uwalniania cząstek w obecności różnych zmutowanych białek Env SIVsmE543 w porównaniu z uwalnianiem przez WT SIVsmE543 Env). Aby wyjaśnić, czy ulepszone wirusowe uwalnianie wariantów z cytoplazmatycznymi substytucjami gp41 z komórek 293T było rzeczywiście wynikiem antagonizmu BST-2, przeprowadziliśmy to samo doświadczenie w nieobecności BST-2 (Suplementowa Figura 2). W przypadku braku BST-2 poziomy uwalniania wirionu dla WT E543 Env i E543CT # 154 Env były porównywalne względem siebie, wskazując, że różnice obserwowane w obecności rBST-2 na Figurze 7C są rzeczywiście wynikiem BST-ów. 2 antagonizm według wariantów Env. Gp41 sekwencje historycznych stad wirusowych z seryjnych pasaży. Neowowirusowy wirus SIVsm804E wyizolowano po 4 kolejnych przejściach nienowotworowego wirusa rodzicielskiego SIVsmE543-3 przez makaki rezus. Aby określić czas nabycia 4 kluczowych substytucji aminokwasowych w 3. Porównano gp41, sekwencję aminokwasową wirusów wydzielonych podczas sekwencyjnego pasażowania in vivo przeprowadzonego w celu uzyskania SIVsm804E (pasaż 1, SIVsmH455, pasaż 2, SIVsmH631Br, pasaż 3, SIVsm783Br i pasaż 4, SIVsm804E). Podstawienia aminokwasowe w pozycjach I805T, I828R, T829A i V878I kumulowały się w sekwencyjnych pasażach. Po pierwszym przejściu żaden z wariantów SIVsmH445 nie zawierał mutacji, które uznaliśmy za odpowiedzialne za wzmocniony antagonizm BST-2. Mutacje te pojawiły się po drugim fragmencie, ponieważ z 7 (14%) wariantów SIVsmH631Br zawierał I805T, a wszystkie warianty zawierały mutację T829A
[więcej w: omega kleszczów, gimnazjum lubasz, gimnazjum w lubaszu ]