legnica ginekolodzy

Doszliśmy do wniosku, że produkcja NO jest jednym z czynników ograniczających wzrost M. tuberculosis WT. Fakt, że zaobserwowaliśmy, że komórki eNOS + / PDPN + są pozytywne dla M. tuberculosis w ludzkich próbkach węzłów chłonnych (Figura 6F) wspiera rolę tego enzymu w kontroli ludzkiej pozapłucnej gruźlicy. Rysunek 6NO ogranicza wzrost cytozolowej M. tuberculosis. (A) Western blot i oznaczanie ilościowe poziomów białka w komórkach eNOS i iNOS w 48 godzin po zakażeniu (znormalizowane na aktynę) w niezakażonych i zakażonych WT. Zakażonych aktywowanych (czerwone słupki) lub spoczynkowych (niebieskie słupki) próbek hLEC . Paski błędów reprezentują średnią. SEM z 4 replikatów biologicznych. (B) Obrazy przedstawiające reprezentatywne obszary zakażonych hLEC M. tuberculosis WT. Po 48 godzinach infekcji w warunkach aktywacji lub spoczynku. Obrazy pokazują bakterie wyrażające EGFP, endogenny eNOS. lub iNOS . Alexa Fluor 546 i DNA znakowany DAPI. Strzałki pokazują kolokalizację bakterii i eNOS. Pasek skali: 5 m. (C) Kwantyfikacja połączenia eNOS (górny panel) i iNOS (dolny panel) z M. tuberculosis WT z obrazów, takich jak te w C w 48 godzin po zakażeniu. Procenty odnoszą się do proporcji populacji eNOS + / iNOS + (tj. Do populacji w obrębie każdego kropkowanego pola). Paski błędów reprezentują średnią. SEM z co najmniej 4 powtórzeń biologicznych. ** P <0,01, *** P <0,001, test dwustronny dla ucznia. (D) Wzrost (fluorescencja GFP na komórkę) M. tuberculosis WT, M. tuberculosis. RD1 lub M. tuberculosis. RD1: comp po 48 godzinach infekcji w nietraktowanych (kontrolnych) hLEC lub hLECs traktowanych 250. M l -NMMA w aktywowanych (czerwone symbole) lub w stanie spoczynku (niebieskie symbole). Paski błędów reprezentują średnią. SEM co najmniej 3 replikatów biologicznych. * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001, jednoczynnikowa ANOVA z testem post-hoc Tukeya. (E) Reprezentatywny przekrój histologiczny ludzkich węzłów chłonnych barwionych dla PDPN, M. tuberculosis, eNOS i jąder (DAPI). Kropkowana linia wskazuje obszar ziarniniakowy. Pasek skali: 50 .m. (F) Obrazy obszaru naczynia limfatycznego pokazujące lokalizację M. tuberculosis w komórkach PDPN + i eNOS + (białe strzałki). Pasek skali: 10 .m. Dyskusja W tych badaniach zidentyfikowaliśmy LEC jako naturalną niszę dla replikacji M. tuberculosis w ludzkich węzłach chłonnych. To otwiera możliwość, że śródbłonek limfatyczny i LEC są bardziej aktywnymi graczami w rozwoju gruźlicy limfatycznej niż wcześniej sądzono. Związek sieci limfatycznej śródbłonka z ziarniniakami M. tuberculosis został wcześniej wykazany w węzłach chłonnych naczelnych innych niż człowiek (33) i płuc świnek morskich (34). Dostarczamy klinicznych dowodów na to, że hLEC zawierają M. tuberculosis w naczyniach limfatycznych powiązanych z ziarniniakami w węzłach chłonnych. Zgodnie z tym poglądem niedawno wykazano, że ziarniaki gruźlicze wykazują ekspresję VEGF, a infekcja prątkami indukuje przebudowę limfatyczną i limfangiogenezę poprzez ekspresję VEGFR-3 (35, 36). Chociaż DNA z M. tuberculosis znaleziono w śródbłonku w ludzkich płucach (16), to czy LEC wyściełające system limfatyczny w płucach może być również zakażone przez M. tuberculosis, to pytanie otwarte. Mielocytowe komórki mogą eksprymować markery śródbłonka i mogą być prekursorami nowych naczyń limfatycznych (37). W naszych badaniach struktura morfologiczna i kolokalizacja w węźle chłonnym, jak pokazano na podstawie oznaczenia PDPN i LYVE-1, są zgodne z tymi w naczyniach limfatycznych. Nie można wykluczyć, że nowo zrekrutowane komórki mielocytarne przyczyniające się do zapalnego procesu limfangiogennego mogą również zawierać bakterie. W tym kontekście hipoteza, że prekursory myelocytarne zakażone M. tuberculosis mogą przyczyniać się do limfangiogenezy w ziarniniaku jest interesującą hipotezą, która wymaga dalszych badań. hLEC wyrażają receptory ważne dla odpowiedzi na patogeny, w tym MR (18, 38) [podobne: pokrzywka objawy, penire plus opinie, oparzenia pierwsza pomoc ]