lek na żylaki na nogach

Niespodziewanie, wszystkie chimeryczne wirusy wykazały znacznie wyższą replikację w MDM w porównaniu z SIVsmE543-3 (4E4, P = 0,0001; 6E6, P = 0,0029; i 7E7, P = 0,0026), co wskazuje, że 3. region gp41 / nef / LTR wprowadzony z SIVsm804E zapewniał wzmocnioną replikację w makrofagach (Figura 1, B i C). Figura 1. Replikacja wirusa w PBMC i MDM. (A) Schemat ideowy SIVsmE543-3, SIVsm804E i 3 chimerycznych klonów. Białe paski wskazują otwarte ramki odczytu (ORF) z SIVsmE543-3; czarne paski wskazują ORF z SIVsm804E. (B) Kinetyka replikacji SIVmac239, SIVsmE543-3, SIVsm804E i 3 chimeryczne klony SIVsmE543-3 zawierające 3. gp41 / nef / LTR z SIVsm804E na PBMC i MDM. Przeprowadzono trzy niezależne doświadczenia z PBMC i MDM otrzymanymi od dawców RhDCCW i RhMO3. Przedstawiono reprezentatywny eksperyment (dawcy RhMO3). (C) Przedstawiono średnią wydajność replikacji znormalizowaną jako procent maksymalnej aktywności replikacyjnej osiągniętej dla różnych preparatów komórkowych zainfekowanych wskazanym zestawem wirusów. Paski przedstawiają standardowe błędy średnich znormalizowanych wartości uzyskanych na komórkach izolowanych z różnych makaków. ** P. 0,01 i **** P. 0,0001, 2-drożna ANOVA (kinetyka replikacji chimerycznych klonów w porównaniu z SIVsmE543). Identyfikacja podstawień aminokwasowych odpowiedzialnych za wzmocnioną replikację w makrofagach. Aby zidentyfikować region (y) odpowiedzialny (e) za wzmocnioną replikację SIVsm804E w makrofagach, skonstruowano 2 dodatkowe klony chimeryczne przez wprowadzenie nef i / lub 3. gp41 z SIVsm804E CL7E7 do oryginalnego SIVsmE543-3 i zostały one oznaczone odpowiednio SIVsmE543 804CTN i SIVsmE543 804CT (rysunek 2A). Profile replikacji 3 chimerycznych klonów były porównywalne z profilami SIVsmE543-3 w PBMC. Jednak wszystkie chimeryczne klony zawierające 3. gp41 z SIVsm804E wykazało zwiększoną replikację w MDM (804CTN, P = 0,0044; 804ECT, P = 0,0032), wskazując, że mutacja (y) w 3. region gp41 był odpowiedzialny za wzmocnioną replikację w makrofagach (Figura 2, B i C). W celu dalszego określenia, która konkretna mutacja (e) była odpowiedzialna za wzmocnioną replikację, 3. część gp41 SIVsm804E CL4E4, CL6E6 i CL7E7 zsekwencjonowano i sekwencje aminokwasów wyrównano. Ponieważ zwiększoną replikację w makrofagach zaobserwowano konsekwentnie wśród wszystkich 3 chimerycznych klonów, uważano, że odpowiedzialne są substytucje aminokwasów, które były konserwowane wśród 3 klonów. W rezultacie zidentyfikowano 4 substytucje aminokwasowe I805T, I828R, T829A i V878I (Figura 3A). Aby przetestować, które z tych 4 aminokwasowych substytucji było odpowiedzialne za wzmocnioną replikację, wprowadziliśmy pojedyncze substytucje aminokwasowe do SIVsmE543-3 przez ukierunkowaną mutagenezę (Figura 3B), a replikację tych 4 mutantów oceniano w PBMC i MDM. Zgodnie z wynikami z Figury 2B, replikacja SIVsmE543-3 i wszystkich 4 mutantów w PBMC była podobna. Jednak, co zaskakujące, wszystkie mutanty wykazały również zwiększoną replikację w MDM. Chociaż obserwowany wzrost w przypadku 543CT # i 543CT # 2 był niewielki, inne porównania wykazały statystycznie istotne różnice (# 3, P = 0,0025, # 4, P = 0,0352, # 154, P = 0,0141). Ten wynik wskazuje, że wszystkie 4 mutacje nadawały ulepszoną replikację w makrofagach w różnym stopniu, pozornie niezależne od siebie (Figura 4, A i B). Rysunek 2 Określanie regionu (ów) odpowiedzialnego za ulepszoną replikację w MDM. (A) Przedstawiono schemat chimerycznych wirusów. Białe paski wskazują ORF z SIVsmE543-3; czarne paski wskazują ORF z SIVsm804E. (B) Kinetyka replikacji SIVmac239, SIVsmE543-3, SIVsm804E i 3 chimeryczne klony SIVsmE543-3 zawierające różne regiony z SIVsm804E na PBMC i MDM
[podobne: operacja kręgosłupa szyjnego, pluskwy ugryzienia, penire plus opinie ]