psychoterapia on line

Przeprowadzono trzy niezależne doświadczenia z PBMC i MDM otrzymanymi od dawców RhDCCW i RhMO3. Przedstawiono reprezentatywny eksperyment (dawcy RhMO3). (C) Sposoby wydajności replikacji znormalizowane jako procent maksymalnej aktywności replikacyjnej osiągniętej dla różnych preparatów komórkowych zainfekowanych wskazanym zestawem wirusów. Paski przedstawiają standardowe błędy średnich znormalizowanych wartości uzyskanych na komórkach izolowanych z różnych makaków. ** P. 0,01, 2-drożna ANOVA (kinetyka replikacji chimerycznych klonów w porównaniu z SIVsmE543). Rysunek 3D Określenie konkretnej substytucji aminokwasowej odpowiedzialnej za wzmocnioną replikację w MDM. (A) 3. sekwencje gp41 aminokwasów 3 klonów SIVsm804E. Podstawienia aminokwasów konserwowane wśród wszystkich 3 klonów zaznaczono na czerwono. (B) Sekwencje aminokwasowe 5 klonów SIVsmE543-3 z mutacją punktową (punktami) wprowadzonymi w 3. gp41 ogon cytoplazmatyczny. Podstawienie (-a) aminokwasowe wskazano na czerwono. Gwiazdki wskazują kodony stop. Figura 4 Wpływ mutacji na zdolność replikacji in vitro. (A) Kinetyka replikacji SIVsmE543CT # 1, 543CT # 2, 543CT # 3, 543CT # 4 i 543CT # 154 na PBMC i MDM. Przeprowadzono trzy niezależne doświadczenia z PBMC i MDM otrzymanymi od dawców RhDCCW i RhDCRG. Przedstawiono reprezentatywny eksperyment (dawcy RhDCCW). (B) Sposoby wydajności replikacji znormalizowane jako procent maksymalnej aktywności replikacyjnej osiągniętej dla różnych preparatów komórkowych zainfekowanych wskazanym zestawem wirusów. * P. 0.05 i ** P. 0,01, 2-drożna ANOVA (kinetyka replikacji mutantów SIVsm w porównaniu z SIVsmE543). Ocena poziomów Env włączonych do wirionów. Doniesienia sugerują, że skrócenie ogonka cytoplazmatycznego gp41 zwiększa włączanie wirionów do Env, co może zwiększać replikację wirusa w makrofagach poprzez zwiększoną aktywność fuzji (24. 26). Chociaż mutacje w niniejszym badaniu (I805T, I828R, T829A i V878I) nie prowadziły do skracania, wpłynęły na ogon cytoplazmatyczny gp41. Dlatego też, aby ocenić, czy te 4 substytucje aminokwasowe wpłynęły na włączenie glikoprotein Env przez wiriony, klony SIVsmE543-3 i SIVsmE543CT zostały oczyszczone, zagęszczone i zbadane za pomocą SDS-PAGE przy użyciu dwukolorowej metody obrazowania fluorescencyjnego (Figura 5A), i obliczono stosunek zawartości wirionu p27 do zawartości gp120 wirionów (Figura 5B i pozycje 27, 28). Poziom białka Env wbudowanego w wirion pomiędzy klonów SIVsmE543-3 i SIVsmE543CT nie różnił się znacząco, co wskazuje, że mutacje, które zidentyfikowaliśmy jako wzmacniające replikację w makrofagach, nie wpływają na włączanie wirionów do Env. Analiza immunoblotów była również zgodna z tą interpretacją (Suplementowa Figura 1, materiał uzupełniający dostępny online w tym artykule; doi: 10.1172 / JCI83725DS1). Figura 5 Analiza zawartości Env powiązana z wirionem. (A) Żel SDS-PAGE barwiony 2 barwnikami SYPRO w celu wykrycia i oznaczenia ilościowego glikoproteiny (zielonej) i białka całkowitego (czerwonego). Oczyszczone klony WT SIVsmE543-3 i SIVsmE543CT poddano lizie i przeprowadzono na tym samym żelu z dobrze scharakteryzowanymi wirusami referencyjnymi i seryjnymi rozcieńczeniami ilościowo oczyszczonych gp120 i p27 dla ustalenia standardowych krzywych dla analizy densytometrycznej. MW std, standardy masy cząsteczkowej (kDa). Przedstawiono przedstawiciela 2 niezależnych eksperymentów. (B) stosunek p27 / gp120 klonów WT SIVsmE543-3 i SIVsmE543CT, wraz z dobrze scharakteryzowanym HIV-1 (BAL i NL-4-3) i SIVmac239. Dane oznaczają środki. SEM z 2 niezależnych analiz. Ocena skuteczności uwalniania wirusa / antagonizm BST-2. Oprócz potencjalnego wpływu skrócenia gp41 na poziom włączonych do wirionów glikoprotein Env, doniesiono, że mutacje w ogonie cytoplazmatycznym gp41 wpływają na antagonizm wirusa BST-2 (znany również jako tetherin lub CD317) (29)
[hasła pokrewne: operacja kręgosłupa szyjnego, płesznik, oparzenia pierwsza pomoc ]