Rodzinna ciążowa nadczynność tarczycy spowodowana przez zmutowany receptor tyreotropowy nadwrażliwy na ludzką gonadotropinę kosmówkową cd

Sekwencja segmentu zawierającego mutację została zweryfikowana na obu niciach. Plazmidy kodujące dzikiego typu lub zmutowane receptory tyreotropinowe i dziki hormon luteinizujący lub receptory hormonu folikulotropowego transfekowano do komórek COS-7 metodą DEAE-dekstranu. Ekspresję na powierzchni komórki receptorów typu dzikiego i zmutowanych oceniano za pomocą cytometru przepływowego FACScan (Becton Dickinson, San Diego, CA) z mysim przeciwciałem monoklonalnym (BA-8), które rozpoznaje konformacyjny epitop zewnątrzkomórkowej domeny ludzkiego receptora tyreotropowego.12
Wytwarzanie cyklicznego AMP (cAMP) mierzono w komórkach w linii podstawowej i po inkubacji przez 60 minut 11 z bydlęcą tyreotropiną (Sigma, Bornem, Belgia), gonadotropiną kosmówkową z moczu kobiet ciężarnych (Intervet, Chorulon, Turnhout, Belgia) i rekombinowany hormon folikulotropowy (Organon, Bruksela, Belgia).
Wyniki
Ustalanie kolejności
Bezpośrednie sekwencjonowanie produktów PCR amplifikowanych z genomowego DNA od pacjenta zidentyfikowało substytucję guaniny dla adeniny w kodonie 183 w eksonie 7 w jednym allelu genu receptora tyreotropiny. To podstawienie powoduje zastąpienie reszty lizynowej argininą (K183R) w pozycji 183 receptora, która znajduje się w środku zewnątrzkomórkowej domeny N-końcowej. Matka pacjenta była heterozygotyczna pod względem tej samej mutacji. Mutacja niweluje miejsce restrykcyjne Alu I, cechę, która pozwala na łatwe badanie ogólnej populacji. Żaden ze 100 niespokrewnionych zdrowych osób nie nosił mutacji, wykluczając możliwość, że jest to powszechny polimorfizm.
Funkcjonalna charakterystyka zmutowanego receptora
Figura 2. Figura 2. Funkcjonalna charakterystyka zmutowanego receptora tyreotropiny w komórkach COS-7. Panel A pokazuje wpływ stymulacji wytwarzania cAMP przez stopniowane stężenia bydlęcej tyreotropiny w komórkach transfekowanych dzikiego typu lub zmutowanego receptora tyreotropinowego. Mediana (. SE) skutecznego stężenia bydlęcej tyreotropiny wynosiła 0,76 . 0,24 .U na mililitr w komórkach transfekowanych receptorem typu dzikiego i 0,75 . 0,08 .U na mililitr w komórkach transfekowanych zmutowanym receptorem. Panel B pokazuje wpływ stymulacji wytwarzania cAMP przez stopniowe stężenia gonadotropiny kosmówkowej w komórkach transfekowanych dzikiego typu lub zmutowanego receptora tyreotropinowego. Panel C pokazuje wpływ stymulacji wytwarzania cAMP przez stopniowe stężenia gonadotropiny kosmówkowej w komórkach transfekowanych dzikiego receptora hormonu luteinizującego lub zmutowanego receptora tyreotropinowego. Komórki inkubowano z bydlęcą tyreotropiną lub gonadotropiną kosmówkową przez 60 minut. Transfekcje przeprowadzono trzykrotnie. Reprezentatywne wyniki przedstawiono dla jednego z trzech oddzielnych eksperymentów w przypadku paneli B i C oraz dla jednego z czterech oddzielnych doświadczeń w przypadku panelu A. Pręty I wskazują błędy standardowe.
Po transfekcji do komórek COS-7 zmutowany cDNA ulegał ekspresji na powierzchni komórki w stężeniu podobnym do stężenia receptora typu dzikiego (dane nie pokazane). Podstawowa produkcja cAMP w komórkach eksprymujących zmutowany receptor była podobna do tej w komórkach wyrażających receptor typu dzikiego, podobnie jak czułość i maksymalna reaktywność komórek względem bydlęcej tyreotropiny (Figura 2A)
[podobne: cilostazol, Białkomocz, wdrożenia magento ]
[patrz też: Choroba Perthesa, przeciski pod drogami, blinatumomab ]
[więcej w: operacja kręgosłupa szyjnego, opiekun osoby starszej, orteza na kolano ]