woda brzozowa właściwości na włosy

W każdym punkcie czasowym komórki zebrano i poddano lizie w 400 ul buforu Nonidet P-40. Dezoksycholanu (NP-40. DOC) (20 mM Tris-HCl [pH 8], 120 mM NaCl, 2 mM EDTA, 0,5% DOC, 1% NP-40). Nadsącz hodowlany przesączono przez filtry wirówkowe z wirówkami 0,45 .m porów A-granulowanej celulozy octanowej Spin-X (Sigma-Aldrich) w celu usunięcia pozostałych komórek i szczątków komórek. Cząstki wirusa zostały następnie speletowane z supernatantów bez komórek w mikrowirówce (4 ° C, 90 minut, 16 000 g). Peletowane wiriony poddano lizie w 400 .l buforu NP-40 .DOC. Lizaty komórkowe oczyszczono przez inkubację w temperaturze 4 ° C przez godzinę z kulkami białka A-Sepharose (Sigma-Aldrich) i immunoprecypitowano z IgG HIV (program NIH Research and Reference odczynnik [katalog 3957]). Immunoprecypitaty solubilizowano przez ogrzewanie w buforze do próbek zawierającym 2% SDS, 1% merkaptoetanol, 1% glicerol i 65 mM Tris-HCl (pH 6,8) i rozdzielano przez SDS-PAGE przy użyciu 12% żeli poliakrylamidowych. Żele utrwalono, inkubowano przez 20 minut w M kwasie salicylowym (Sigma-Aldrich) i wysuszono. Pasma radioaktywne wizualizowano za pomocą fluorografii, stosując folie Bio-Max MR (Kodak). Ocenę ilościową odpowiednich pasm przeprowadzono za pomocą analizatora obrazu Fujix BAS 2000. Wydajność uwalniania cząstek w każdym punkcie czasowym obliczono dzieląc ilość białek Gag obecnych w wyselekcjonowanej frakcji wirusa przez całkowitą ilość białek Gag związanych z komórkami i wirusami. Stosunek związanego z wirionem w porównaniu z całkowitym białkiem Gag został następnie wykreślony jako funkcja czasu. W tym celu dane z 2 niezależnych doświadczeń znormalizowano, przyjmując maksymalne uwalnianie w punkcie 5-godzinnym w obecności ROD10 jako 100%. Replikacja in vivo SIVsmE543CT nr 154. Naiwne makaki z rezusów pochodzenia indiańskiego zostały przebadane pod kątem TRIM5. w tym badaniu wybrano genotyp i 9 zwierząt o umiarkowanie podatnym TFP / Q. Sześć zwierząt zaszczepiono iv 500 TCID50 SIVsmE543CT nr 154, a pozostałe 3 zwierzęta zaszczepiono 1000 TCID50 SIVsmE543-3. Stężenia RNA wirusa w osoczu były okresowo monitorowane. Geometryczne średnie z 95% CI wirusów obliczano za pomocą oprogramowania GraphPad Prism. H890 został wyłączony z tych obliczeń, ponieważ systemowa replikacja wirusa była kontrolowana ponad 6 tygodni po zakażeniu z nieznanych przyczyn. Statystyka. Aby ocenić istotność statystyczną obserwowanych różnic w kinetyce replikacji skonstruowanych wirusów w porównaniu z kinetyką replikacji SIVsmE543 lub różnicami w kinetyce uwalniania cząstek wirusa w obecności różnych białek SIV Nef lub Env, powtarzane pomiary 2-drożnej ANOVA z post-hoc wielokrotne porównania za pomocą niezabezpieczonego testu Fishera zostały przeprowadzone przez GraphPad Prism 6 dla Windows, wersja 6.04. Istotność oznaczono jako P <0,05. Zatwierdzenie badania. Wszystkie zwierzęta były trzymane zgodnie z normami American Association for Accreditation of Laboratory Animal Care. Badacze zastosowali się do Przewodnika po opiece i wykorzystywaniu zwierząt laboratoryjnych (National Academies Press. 2011.) oraz do zatwierdzonych przez Komitet NIAID badań na zwierzętach i ich stosowania. Wkłady autorskieKM zaprojektował studium, przeprowadził eksperymenty, przeanalizował dane i napisał artykuł. VMH i KS zaprojektowali badanie i napisali artykuł. CYC przeprowadził eksperymenty i przeanalizował dane. EC, DJR, FW, RJP i SW przeprowadzili eksperymenty. JDL i ABW nadzorowały eksperymenty. IO przeprowadziło analizę statystyczną. Materiał dodatkowy Zobacz dodatkowe dane Podziękowania Dziękujemy Heather Cronise, Joanne Swerzyck i Richardowi Herbertowi z NIH Animal Center za doskonałą opiekę nad zwierzętami. Praca ta była wspierana przez fundusze federalne z wewnętrznego programu NIAID, NIH oraz z funduszy federalnych z National Cancer Institute, NIH (kontrakt HHSN261200800001E). Przypisy Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J Clin Invest. 2016; 126 (6): 2295. 2307. doi: 10.1172 / JCI83725. [więcej w: pokrzywka objawy, ph metria, oparzenia chemiczne ]